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Doença de chagas: manual para

experimentação animal

 

FUNDAÇÃO OSWALDO CRUZ

Presidente

Eloi de Souza Garcia

Vice-Presidente de Ambiente, Comunicação e Informação Maria Cecília de Souza Minayo

EDITORA FIOCRUZ

Coordenadora

Maria Cecília de Souza Minayo

Conselho Editorial

Carlos E. A. Coimbra Jr.

Carolina M. Bori

Charles Pessanha

Hooman Momen

Jaime L. Benchimol

José da Rocha Carvalheiro

Luiz Fernando Ferreira

Luiz David Castiel

Miriam Struchiner

Paulo Amarante

Paulo Gadelha

Paulo Marchiori Buss

Vanize Macêdo

Zigman Brener

Coordenador Executivo

João Carlos Canossa P. Mendes

Copyright © 2000 dos autores

Todos os direitos desta edição reservados à FUNDAÇÃO OSWALDO CRUZ / EDITORA

ISBN: 978-85-7541-393-7

Capa, projeto gráfico e tratamento de imagens Angélica Mello

Editoração eletrônica

Beatriz de Moraes Vieira

Preparação de originais e copidesque

Solange L. de Castro

Revisão

Marly Willcox

Revisão final

Marcionílio Cavalcanti de Paiva

Catalogação-na-fonte

Centro de Informação Científica e Tecnológica Biblioteca Lincoln de Freitas Filho

 

J82d

Jorge, Tania C. de Araújo (org.)

Doença de chagas [livro eletrônico] : manual para experimentação animal. / Organizado por Tania C. de Araújo-Jorge e Solange Lisboa de Castro. – Rio de Janeiro : Editora Fiocruz / Instituto

Oswaldo Cruz, 2000.

13966 Kb ; ePUB ; il., tab.

1. Doença de Chagas-induzido quimicamente 2. Animais de Laboratório 3. Manuais de Laboratório [tipo de publicação] I. Castro, Solange Lisboa de (org.)

CDD - 20.ed. – 616.9363

 

2000

EDITORA FIOCRUZ

Rua Leopoldo Bulhões, 1480, térreo – Manguinhos 21041-210 – Rio de Janeiro – RJ

Tels.: (21) 598-2701 e 598-2702

Telfax: (21) 598-2509

Para

Carlos Chagas, o pai, o desbravador de um caminho

que hoje muitos pesquisadores brasileiros estão seguindo,

mirando-se no seu exemplo único e admirável

de cientista, médico e formador

de investigadores para lidar com

problemas que atingem a gente brasileira.

Carlos Chagas, o filho, que nos conduziu pelos caminhos da

ciência,

da filosofia e da ética, através de suas aulas, conselhos

e apoio para atividades de divulgação e popularização científicas,

além das muitas "caronas" na volta para casa após o dia-a-dia

da rotina com que nos formamos cientistas no ?

Instituto de Biofísica que leva seu nome.

O prazer do convívio com este grande mestre só

não suplanta o privilégio de termos podido estar e aprender com ele.

Maria P. Deane, a cientista brilhante, a mulher de fibra,

ousada na vida e na ciência,

a voz dos pesquisadores em tantas lutas,

questionadora de paradigmas,

e sobretudo a grande mestra na experimentação animal,

que nos ensinou a ter um profundo respeito pelos animais de

laboratório.

Sentimos sua ausência.

 

Agradecimentos

Este trabalho foi realizado com o estímulo de muitos colegas, a

quem

agradecemos. Gostaríamos de apresentar agradecimentos

especiais

• aos nossos alunos, que nos vêm desafiando para uma postura mais ativa e criativa no ensino da parasitologia, biologia celular e imunologia, e que testaram, na prática, cada um dos protocolos apresentados neste manual, por vezes assinando a co-autoria de alguns capítulos;

• aos nossos primeiros orientadores, professores Wanderley de Souza, Maria de Nazareth Meirelles e Mécia M. Oliveira, que além de nos apresentarem ao Trypanosoma cruzi e aos camundongos infectados, nos brindam com sua amizade firme e constante;

• ao professor José Rodrigues Coura, incansável mestre e batalhador, que está sempre pronto a nos ajudar, seja com aulas, textos, conselhos, sugestões e, sobretudo, pelo empenho para a edição final desta publicação;

• ao professor Zigman Brener, que vem acompanhando e influenciando, continuamente, nosso trabalho desde os tempos de estudantes, até nossa atuação profissional, sempre com sugestões oportunas e com inestimável ajuda cada vez que solicitamos. Não é sem razão que ele vem participando, sistematicamente, das diversas bancas de teses que doutoraram os pesquisadores do nosso departamento;

• aos colegas do Departamento de Ultra-estrutura e Biologia Celular do IOC que nos deram "cobertura logística", dividindo muitas das atribuições que deixamos acumular por conta do tempo necessário para a conclusão deste trabalho;

• aos nossos colaboradores para a redação dos diferentes capítulos, não só pela qualidade das contribuições, como pela paciência até a publicação final;

• aos nossos filhos Julia, Pedro, Luiza e Bruno, e aos nossos companheiros, Luiz e Alexandre, além da Lúcia, que pacientemente nos aguardaram chegar tarde, dias seguidos, para que concluíssemos o preparo destes originais.

 

Autores

Ana Maria Jansen - Deptº de Protozoologia, IOC/Fiocruz -

jansen@gene.dbbm.fiocruz.br Ana Paula S. Pinho - Deptº de Protozoologia, IOC/Fiocruz -

pinhoap@gene.dbbm.fiocruz.br Andrea Henriques Pons - Deptº de Ultra-estrutura e Biologia

Celular, IOC/Fiocruz - andreah@gene.dbbm.fiocruz.br Andreia Pereira de Souza - Deptº de Ultra-estrutura e Biologia

Celular, IOC/Fiocruz - souzaap@gene.dbbm.fiocruz.br Angela C. V. Junqueira - Deptº de Medicina Tropical, IOC/Fiocruz -

junqueir@gene.dbbm.fiocruz.br Bianca Perdigão Olivieri -Deptº de Ultra-estrutura e Biologia

Celular, IOC/Fiocruz - olivieri@gene.dbbm.fiocruz.br Celia V. P. Cardoso - Centro de Criação de Animais de

Laboratório/Fiocruz - cardoso@cecal.fiocruz.br Claude Pirmez - Deptº de Bioquímica e Biologia Celular,

IOC/Fiocruz -/Fiocruz - pirmez@gene.dbbm.fiocruz.br Claudia M. L. M. Coutinho - Instituto de Ciências Biológicas/UFF -

claudia@gene.dbbm.fiocruz.br Cristiane V. Lisboa - Deptº de Protozoologia, IOC/Fiocruz -

gltp@gene.dbbm.fiocruz.br

David A. Campbell - School of Medicine/Universidade da

Califórnia/LA/EUA - dcp@pop.ucla.edu Edmundo Chapadeiro - Disciplina de Parasitologia/Faculdade de Medicina do Triângulo Mineiro

Elen Mello de Souza - Deptº de Ultra-estrutura e Biologia Celular,

IOC/Fiocruz - elen@gene.dbbm.fiocruz.br

Eliane Lages-Silva - Disciplina de Parasitologia/Faculdade de Medicina do Triângulo Mineiro

Elisa Cupolillo - Deptº de Imunologia, IOC/Fiocruz -

ecupoli@ioc.fiocruz.br

George A. dos Reis - Lab. de Biologia Imunitária, Instituto de

Biofísica Carlos Chagas Filho/UFRJ - gdosreis@ibccf.ufrj.br Gislâine A. Martins - Deptº de Parasitologia, Microbiologia e Imunologia, Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto/USP -

gmartins@fmrp.usp.br

Helene Santos Barbosa - Deptº de Ultra-estrutura e Biologia

Celular, IOC/Fiocruz - helene@ioc.fiocruz.br Jacenir S. Mallet - Deptº de Entomologia, IOC/Fiocruz -

jacenir@gene.dbbm.fiocruz.br João Santana Silva - Deptº de Parasitologia, Microbiologia e Imunologia, Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto/USP -

jsdsilva@fmrp.usp.br

José Rodrigues Coura - Deptº de Medicina Tropical, IOC/Fiocruz -

jcoura@ioc.fiocruz.br

Julio C. S. Aliberti - Deptº de Parasitologia, Microbiologia e Imunologia, Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto/USP -

jaliberti@atlas.niaid.nih.gov

Katia S. Calabrese - Deptº de Protozoologia, IOC/Fiocruz -

calabres@gene.dbbm.fiocruz.br

Luis Eduardo Ramírez- Disciplina de Parasitologia/Faculdade de

Medicina do Triângulo Mineiro parasito.fmtm@mednet.com.br Marcelo Einicker-Lamas - Deptº de Ultra-estrutura e Biologia

Celular, IOC/Fiocruz - einicker@ibccf.biof.ufrj.br Marcos Antonio P. Marques - Centro de Criação de Animais de

Laboratório/Fiocruz - marques@cecal.fiocruz.br Maria da Glória Boneceni-Almeida - Deptº de Microbiologia, Imunologia e Parasitologia, CPHEC/Fiocruz -

galmeida@gene.dbbm.fiocruz.br

Maria de Nazareth Meirelles - Deptº de Ultra-estrutura e Biologia

Celular, IOC/Fiocruz - meirelle@gene.dbbm.fiocruz.br Maria Nazaré Soeiro - Deptº de Ultra-estrutura e Biologia Celular,

IOC/Fiocruz - nazare@gene.dbbm.fiocruz.br Maria Teresa Rivera - Deptº de Ultra-estrutura e Biologia Celular,

IOC/Fiocruz - jean.vanderpas@skynet.be Mecia M. Oliveira - Lab. de Biomembranas, Instituto de Biofísica

Carlos Chagas Filho/UFRJ - mecia@chagas.biofis.ufrj.br Mirian C. Pereira - Deptº de Ultra-estrutura e Biologia Celular,

IOC/Fiocruz - mirian@gene.dbbm.fiocruz.br Octavio Fernandes - Deptº de Medicina Tropical, IOC/Fiocruz -

octaviof@gene.dbbm.fiocruz.br Paulo Renato Antas - Deptº de Ultra-estrutura e Biologia Celular,

IOC/Fiocruz - pzuquim@gene.dbbm.fiocruz.br Pedro H. Cabello - Deptº de Genética, IOC/Fiocruz -

cabello@gene.dbbm.fiocruz.br Regina Helena Mangia - Deptº de Medicina Tropical, IOC/Fiocruz Renato Marchewsky - Lab. de Neurovirulência, Biomanguinhos/Fiocruz

Ricardo de Mattos Santa-Rita - Deptº de Ultra-estrutura e Biologia

Celular, IOC/Fiocruz - santarit@gene.dbbm.fiocruz.br Sebastião Enes R. Couto - Centro de Criação de Animais de

Laboratório/Fiocruz - scouto@cecal.fiocruz.br Silvana Marques Araújo - Deptº Análises Clínicas/Universidade

Estadual de Maringá - marqueslima@wnet.com.br Solange Lisboa de Castro - Deptº de Ultra-estrutura e Biologia

Celular, IOC/Fiocruz - solange@ioc.fiocruz.br Sonia G. Andrade - Centro de Pesquisa Gonçalo Moniz/Fiocruz -

sgandrade@cpggm.fiocruz.br Suzana Corte-Real Faria - Deptº de Ultra-estrutura e Biologia

Celular, IOC/Fiocruz - scrf@ioc.fiocruz.br Sylvio Celso G. Costa - Deptº de Protozoologia, IOC/Fiocruz -

sycosta@gene.dbbm.fiocruz.br Tania C. Araújo-Jorge - Deptº de Ultra-estrutura e Biologia Celular,

IOC/Fiocruz - taniaaj@ioc.fiocruz.br Tania Zaverucha do Vale - Deptº de Protozoologia, IOC/Fiocruz -

taniazo@gene.dbbm.fiocruz.br

Valdo D. Silva - Disciplina de Fisiologia/Faculdade de Medicina do Triângulo Mineiro

Vinicius Cotta-de-Almeida - Deptº de Ultra-estrutura e Biologia

Celular, IOC/Fiocruz - vinicius@gene.dbbm.fiocruz.br Wilson Savino - Deptº de Imunologia, IOC/Fiocruz -

savino@gene.dbbm.fiocruz.br

Table of Contents / Sumário / Tabla de

Contenido

 

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Apresentação

Parte 1 - Conceitos atuais em doença de Chagas humana e

experimental

Capítulo 1 - Desafios da pesquisa científica após 90 anos

da descoberta da doença de Chagas

1.1 Questões da doença humana para trabalho em

modelos animais

1.2 A doença de Chagas humana e seus modelos de

estudo

Capítulo 2 - Vetores da doença de Chagas e sua relação

com o hospedeiro vertebrado e o parasita

Capítulo 3 - A ecologia e a complexidade dos ciclos de

transmissão do Trypanosoma cruzi na natureza

Capítulo 4 - Resposta do hospedeiro à infecção

4.1 Respostas imune inata, inflamaiória e de fase

aguda na doença de Chagas

4.2 A resposta imune celular na infecção

experimental por Trypanosoma cruzi

4.3 A resposta imune humoral e as funções do

linfócito B na infecção por Trypanosoma cruzi

4.4 Participação de citocinas no determinismo de

resistência ou susceptibilidade à infecção

experimental por Trypanosoma cruzi

4.5 O timo como órgão-alvo na infecção pelo

Trypanosoma cruzi

4.6 Imunomodulação da resposta T-dependente na

doença de Chagas experimental

Capítulo 5 - Hormônios na doença de Chagas

5.1 Sistema adrenérgico

5.2 Hormônios sexuais

5.3 Prolactina

Capítulo 6 - Relação materno-fetal na infecção chagásica

experimental

Capítulo 7 - Quimioterapia experimental

Parte 2 - Protocolos e métodos de trabalho em doença de

Chagas experimental

Capítulo 8 - Normas de segurança para o trabalho com

Trypanosoma cruzi

Capítulo 9 - Modelos animais para o estudo in vivo da

doença de Chagas e de seus aspectos histopatológicos

9.1 Camundongo

9.2 Rato

9.3 Calomys callosus

9.4 Hamster

9.5 Coelho

9.6 Cão

9.7 Macaco

Capítulo 10 - Planejamento de experimentos e escolha

dos modelos

10.1 Critério de escolha para o modelo de

hospedeiro animal e da cepa do parasita

10.2 Trypanosoma cruzi: cepas de eleição

10.3 Planejamento de um experimento com infecção

in vivo pelo Trypanosoma cruzi

10.4 Manutenção e obtenção dos diferentes estágios

evolutivos em laboratório

Capítulo 11 - Cuidados especiais com animais no biotério

de experimentação

Capítulo 12 - Controle da qualidade dos animais antes da

infecção experimental

Capítulo 13 - Sangria de animais e preparo de inóculos

para infecção experimental

Capítulo 14 - Avaliação de parâmetros parasitológicos e

de mortalidade

Capítulo 15 - Quantificação de marcadores humorais de

inflamação, de resposta imune e de lesão tissular nos

animais infectados

Capítulo 16 - Preparo de células para avaliação de

parâmetros inflamatórios e imunológicos

Capítulo 17 - Coleta e processamento de órgãos e tecidos

para avaliação da infecção

Capítulo 18 - Obtenção de células de camundongo para

estudos in vitro em cultivo primário

18.1 Interação do Trypanosoma cruzi com células

hospedeiras: estudos in vitro

18.2 Protocolos de cultura primária

Capítulo 19 - Sistematização e análise de resultados:

confecção de planilhas, tabelas, gráficos e análises

estatísticas

Capítulo 20 - Anexos