Manual de Sobrevivência no Laboratório de Química Orgânica: Guia de Técnicas para o Aluno
Capítulo 28 Cromatografia de Coluna
Cromatografia de coluna, conforme você pode imaginar, é a cromatografia realizada em uma coluna de adsorvente, em vez de uma camada de adsorvente. É fácil, barata e executada à temperatura ambiente, e você pode também separar grandes quantidades, gramas, de misturas.
Na cromatografia de coluna, o adsorvente é alumina ou sílica gel. A alumina é básica, e a sílica gel é ácida. Se você testar um eluente (solvente) em sílica gel sobre placas e for bem-sucedido, deverá utilizar um adsorvente de sílica gel. E se obtiver bons resultados em CCF usando alumina, utilize uma coluna de alumina.
Agora, você tem um tubo de vidro como suporte que retém o adsorvente no lugar. Você dissolve sua mistura colocando-a no adsorvente no topo da coluna. Então, faz a mistura escoar coluna abaixo, utilizando pelo menos um eluente (solvente), talvez mais de um. Os compostos carreados pelo solvente são removidos completamente para fora coluna para recipientes separados. Dessa maneira, você isola as frações separadas.
PREPARAÇÃO DA COLUNA
1. O adsorvente é sustentado por um tubo de vidro que tem uma torneira
ou um pedaço de mangueira com uma braçadeira de rosca para
controlar o fluxo de eluente (Figs. 28.1 e 28.2). Você também pode
usar uma bureta comum. O que você vai usar depende do laboratório
em que vai trabalhar. Logo acima desse controle, você prende um
chumaço de algodão ou lã de vidro para evitar que o recheio da
coluna caia. Não use algodão ou lã de vidro em demasia, e não
empacote tudo muito apertado. Se você socar a lã dentro do tubo, o
fluxo de eluente ficará muito lento, e você vai ficar no laboratório até
o próximo Natal esperando pela saída do eluente. Se empacotar
frouxo demais, tudo na coluna cairá.
2. Nesse momento, encha a coluna até a metade com o eluente menos
polar que você vai utilizar. Se você não tiver essa informação, pode
descobrir qual é o solvente adequado com uma rápida conferência de
como a mistura se separa em uma placa de CCF. Essa seria a
vantagem de uma placa de CCF de alumina.
3. Lentamente, com a ajuda de um funil, coloque areia dentro da coluna,
até ter uma camada de 1 cm de areia sobre o algodão. O adsorvente
de alumina ou a sílica gel são tão finos que provavelmente
atravessarão o algodão, mas não uma camada de areia fina.
4. Durante todo esse procedimento, mantenha o nível do solvente acima
do de qualquer material sólido dentro da coluna!
5. Agora, adicione o adsorvente lentamente. Há poucas maneiras de
fazer isso: empacotamento de pó e empacotamento de pasta.
Alumina e sílica gel são adsorventes, e quando sugarem o solvente
liberarão calor. Com o empacotamento de pó, se você adicionar o
adsorvente muito rapidamente, ele poderá ferver e arruinar a coluna.
Logo, não o adicione muito rápido; adicione o adsorvente
lentamente! Com o empacotamento de pasta, você adiciona o
solvente ao adsorvente em um bécher, deixa o adsorvente liberar
calor e derrama a pasta dentro da coluna. Em qualquer caso, use uns
25 g de adsorvente para cada grama de mistura que deseja separar.
Enquanto adiciona o adsorvente, bata na coluna delicadamente, ou
faça uma lenta rotação com ela, para desalojar qualquer adsorvente
ou areia que esteja nas laterais. Um pissete de plástico com eluente
dentro pode fazer com que o material escorra facilmente pelas laterais
da coluna para baixo.
FIGURA 28.1 Montagem de cromatografia de coluna.