Manual de Sobrevivência no Laboratório de Química Orgânica: Guia de Técnicas para o Aluno
Cromatografia de Coluna: Microescala
MICROESCALA
Eventualmente, pedirão a você que limpe e/ou seque seu produto utilizando cromatografia de coluna com pipeta. É bem parecida com a cromatografia de coluna em larga escala.
Um problema com essa coluna, que é uma pipeta, é que não existe torneira. Uma vez iniciada a corrida, ela continua até se esvaziar. E você também não pode deixar a coluna secar. Assim, é como se tivesse um compromisso com a corrida da coluna, uma vez que ela tenha iniciado.
De maneira geral (Fig. 28.4),
1. Encurte a ponta de uma pipeta Pasteur (veja “Corte da pipeta” no
Capítulo 7, “Pontas de pipetas”) e tampone a ponta com algodão
como de costume.
FIGURA 28.4 Cromatografia de coluna com pipeta Pasteur.
2. Adicione cerca de 50 mg de areia fina.
3. Agora vem o adsorvente, mais ou menos uns 500 mg. Bata
delicadamente na pipeta para empacotá-la.
4. Coloque um pouco mais de areia no topo, para evitar que o
adsorvente esvoace.
Agora, lentamente, adicione o solvente e deixe-o umedecer toda a
5. coluna.
6. Dissolva sua amostra em uma quantidade mínima de solvente — o
solvente menos polar em que ela se dissolve — e adicione essa
solução lentamente ao topo da pipeta. Não encha a pipeta de líquido;
goteje a solução sobre a areia.
7. Com toda a amostra na coluna, logo abaixo da areia, adicione uma
pequena quantidade do solvente de eluição. Esse pode ser ou não
diferente do solvente em que você dissolveu sua amostra.
8. Espere e observe. Observe e espere. Nunca deixe a coluna secar.
Recolha as gotas que saírem em uma série de frações em alguns
recipientes pequenos.