Manual de Sobrevivência no Laboratório de Química Orgânica: Guia de Técnicas para o Aluno
Amostra no Detector
A CLAE também emprega uma coisa chamada coluna de fase reversa ligada, na qual a fase estacionária é um hidrocarboneto apolar, quimicamente ligado a um suporte sólido. Você pode usar essa coluna com eluentes aquosos, geralmente misturas de álcool-água. Então, você tem um eluente polar e uma fase estacionária apolar, algo que geralmente não ocorre na cromatografia de coluna comum. Uma vantagem é que você não precisa utilizar eluentes anidros com colunas de fase reversa (pequeníssimas quantidades de água podem alterar o caráter de colunas de fase normal).
AMOSTRA NO DETECTOR
Muitos detectores de CLAE podem transformar a presença de seu composto em um sinal elétrico a ser adquirido por um programa de computador. Nos primórdios, eram comuns detectores de índice de refração. Eluente limpo, usado como referência, atravessava um lado do detector, e o eluente com as amostras atravessava o outro lado. Uma diferença do índice de refração entre a amostra e a referência gerava um sinal elétrico que era enviado
para um computador. Se você leu o Capítulo 30 sobre cromatografia a gás
e pulou para o Capítulo 32 sobre espectroscopia no infravermelho, não se surpreenderá ao descobrir uma amostra e uma referência. Eu disse que o par referência-amostra é comum em instrumentação.
FIGURA 31.7 Vista em corte de um detector de UV na CLAE.
Detectores de ultravioleta (UV) são mais sensíveis que detectores de índice de refração e, se você quisesse fazer eluição por gradiente — em que dois ou mais solventes misturados em composições variáveis formam o eluente —, estaria sem sorte. É muito difícil separar continuamente um solvente de referência com composição variável.
Entretanto, e novamente, eluentes usados com detectores de UV não devem absorver muito do UV nos comprimentos de onda que você espera que suas amostras absorvam.
E, em certos casos, você pode usar a área sob a curva CLAE para dizer quanto de cada componente está presente em sua amostra, se os componentes têm absorções diferentes em seus comprimentos de onda de análise no UV. Como muitas montagens de CLAE usam detectores de
fotodiodos, você pode querer olhar a seção de UV-VIS no Capítulo 32.