Vogel: Análise Química Quantitativa
Seção experimental
intensidade da luz refletida pela placa. As diferenças de intensidade da luz
refletida pelo adsorvente e pelas manchas são transformadas em uma série
de picos em uma tela ou em um registrador. As áreas dos picos
correspondem às quantidades dos materiais contidos nas manchas. Um
esquema semelhante funciona para a luz transmitida através das placas.
Usam-se fotodensitômetros para registrar fotograficamente a radiação
refletida ou transmitida pela placa. A fotografia do cromatograma revela
zonas escuras e claras que correspondem às áreas dos compostos separados.
Quando se usam densitômetros, o desvio padrão usual nas determinações
quantitativas por cromatografia em camada fina é melhor do que 5%.
Seção experimental
Segurança. Antes de executar qualquer um dos experimentos desta seção, informe-se
sobre os avisos de segurança e obedeça os regulamentos gerais de segurança de laboratório.
7.7 Separação e recuperação de corantes
Introdução Este experimento ilustra uma técnica adequada para a
recuperação de substâncias puras após separação por TLC. Com
concentrações padronizadas de cada corante, é possível usar o experimento
para mostrar como determinar quantitativamente os compostos recuperados.
Aparelhagem
Placas de sílica gel
Cuba cromatográfica (Fig. 7.2)
Micropipetas ou microcapilares
Produtos químicos Soluções de indicadores ( ∼ 0,1% aq): azul de bromofenol, vermelho do
congo, vermelho de fenol
Mistura (M) de soluções dos três indicadores
Solvente de desenvolvimento: 1-butanol: etanol: amônia 0,2 M (60:20:20
por volume)
Deve-se usar solventes de grau cromatográfico.
Procedimento Coloque o solvente de desenvolvimento na cuba
cromatográfica até cerca de 0,5 cm de altura e fechea com a tampa. Pegue
uma placa com sílica gel e aplique cuidadosamente a amostra, com o
auxílio de uma micropipeta, em pontos na linha de origem (use os
conselhos da Seção 7.2 para a aplicação da amostra). Deixe secar e coloque
a placa na cuba. Deixe o cromatograma se desenvolver por cerca de uma
hora usando a técnica ascendente. Remova a placa, marque a frente de
solvente e seque a placa em uma estufa a 60°C por cerca de 15 minutos.
Meça o valor de R f de cada um dos indicadores.
Pegue uma segunda placa e aplique, com uma micropipeta, 5 μl da
mistura M em três pontos separados da linha de origem. Coloque a placa
seca na cuba cromatográfica, feche e deixe o cromatograma se desenvolver
por cerca de uma hora. Remova a placa, marque a frente de solvente e deixe
secar em estufa a 60°C por cerca de 15 minutos. Identifique os compostos
separados usando seus valores de Rf.
Com uma espátula apropriada, raspe cuidadosamente as manchas de azul
de bromofenol para uma folha limpa de papel macio (fica mais fácil
fazendo-se duas riscas até o vidro, uma em cada lado das manchas).
Coloque o pó azul em um tubo pequeno de centrífuga, adicione 2 ml de
etanol bem como 5 gotas de uma solução de amônia 0,880, e agite
vigorosamente até que o corante seja totalmente extraído. Centrifugue e
remova a solução azul sobrenadante, separando-a do pó branco residual.
Repita o procedimento com as manchas de vermelho do congo e de
vermelho de fenol.
Uma técnica alternativa de eluição é transferir o pó (do azul de
bromofenol, por exemplo) para uma coluna de vidro com um tampão de lã de vidro ou vidro sinterizado e eluir o corante com etanol contendo um