Vogel: Análise Química Quantitativa
17.17 Análise de enzimas
Para medidas no ultravioleta, as concentrações são freqüentemente calculadas pela
relação
coeficiente de absorção molar ε = A/cl
onde A é a absorbância de uma solução de concentração c em uma célula de passo óptico l. Quando a constante ε do composto é conhecida, pode-se calcular a concentração da solução. Em alguns casos, especialmente com produtos naturais, não é possível ter os valores de ε porque os pesos moleculares relativos não são conhecidos. Pode-se, então, recorrer à grandeza , que corresponde à absorbância de
uma solução a 1% em uma célula de 1 cm de passo óptico (Seção 17.2). Estes valores são conhecidos para muitos materiais, inclusive numerosas preparações farmacêuticas.
As Seções 17.20 a 17.30 listam alguns exemplos típicos de determinações
espectrofotométricas de analitos selecionados. A Tabela 17.5 dá outros exemplos de analitos que podem ser determinados colorimétrica ou espectrofotometricamente.
17.17 Análise de enzimas [20]
A análise rotineira de enzimas teve origem nas análises bioquímicas e nas análises clínicas. Os métodos foram depois adaptados para a análise de alimentos e para a bioanálise. Compostos que ocorrem na natureza, como os açúcares, os ácidos e seus sais e os álcoois, podem ser analisados enzimaticamente porque as células vivas contêm enzimas capazes de sintetizar ou decompor estas substâncias. Assim, se uma enzima adequada e um sistema de medida puderem ser usados, o composto pode ser determinado enzimaticamente. Muitos métodos enzimáticos utilizam conjuntos de teste fornecidos comercialmente, como os da Boehringer Mannheim, que são suficientes para um número limitado de determinações do(s) analito(s).
Tabela 17.5 Condições para determinar alguns analitos por espectrofotometria
Analito Reagente pH λ máx (nm)
Al 5,9–6,1 535 Eriocromo cianina R
Sb 425 ou 330 lodeto de potássio
Be 520 4-nitro-benzeno-azo-
orcinol
Bi 460 lodeto de potássio-ácido
hipofosforoso
Co 5,5 425 Sal R-nitroso
Cu 570–600 Oxalil-hidrazona da
biciclo-hexanona
Fe 480 Tiocianato de potássio
1,10-fenantrolina 2,5–4,5 515
Pb 9,5 510 Ditizona
Mg 10,1 520 Preto de solocromo
Mo 670 Tolueno-3,4-ditiol
Ni >7,5 445 Dimetilglioxima
Sn 630 Tolueno-3,4-ditiol
V 400 Ácido fosfórico-tungstato
de sódio