Vogel: Análise Química Quantitativa
Seção experimental
Segurança. Antes de fazer qualquer experimento desta seção preste muita atenção aos avisos de segurança.
Tenha sempre em mente as regras de segurança de laboratório.
8.9 Aspirina, fenacetina e cafeína em uma mistura
A cromatografia líquida de alta eficiência é usada na separação e análise quantitativa de muitas misturas que não podem ser analisadas por cromatografia com fase gasosa, especialmente aquelas em que os componentes são pouco voláteis ou termicamente instáveis. Um bom exemplo é o método descrito a seguir para a determinação quantitativa de aspirina e cafeína em tabletes de analgésicos comuns, usando fenacetina como padrão interno. Se o analgésico contiver fenacetina, este composto também pode ser determinado.
Amostra Para obter uma amostra adequada, pese com exatidão cerca de 0,601 g de aspirina, 0,076 g de fenacetina e 0,092 g de cafeína. Dissolva a mistura em 10 ml de etanol absoluto, adicione 10 ml de formato de amônio 0,5 M e dilua até 100 ml com água desionizada.
Solvente (fase móvel) Prepare uma solução 0,05 M de formato de amônio em etanol 10% em água. Ajuste o pH em 4,8. Use 2 ml·min–1 como velocidade de fluxo e 117 bar (11,7 Mpa) como pressão de entrada.
Coluna Use uma coluna de 15,0 cm × 4,6 mm, empacotada com sílica com fase ligada SCX (resina trocadora de íons fortemente catiônica) de diâmetro 5 μm.
Detector De absorbância no UV em 244 nm (ou 275 nm).
Procedimento Injete 1 μl da amostra e obtenha o cromatograma. Nas condições dadas, a separação se completa em 3 minutos. A seqüência de eluição é (1) aspirina, (2) fenacetina e (3) cafeína. Anote as áreas dos picos e expresse o resultado como percentagem da área total dos picos. Compare os resultados obtidos com a composição conhecida da mistura. As discrepâncias são devidas à resposta diferente do detector para as diferentes substâncias.
Determine os fatores de resposta do detector, r, relativos à fenacetina (= 1) como padrão interno. Para isso faça três injeções de 1 μl e obtenha o valor médio de r:
Como correção, divida as áreas dos picos obtidas anteriormente pelos fatores de resposta adequados. Normalize os valores corrigidos. Compare o resultado com a composição conhecida da mistura.
8.10 Referências 1. J V Mortimer 1967 Liquid chromatography discussion group session. In A B Littlewood (ed) Gas chromatography 1966 (Rome